2x Taq PCR Mix（含染料）

產(chǎn)品貨號(hào)：T0211

存儲(chǔ)條件：-20℃保存

產(chǎn)品說(shuō)明

Taq PCR Mix (含染料) 的濃度為 2×，使用方便快捷，能減少 PCR 操作過(guò)程中的污染，使用時(shí)只需取適量 2×Taq PCR Mix (含染料)，加入模板和引物，并加入 ddH2O 補(bǔ)足體積，使反應(yīng)體系濃度為 1×，即可進(jìn)行 PCR 反應(yīng)。該 Mix 中的 Taq 為篩選獲得的突變體 Taq-AS(Advanced Strong) DNA Polymerase，能夠高效擴(kuò)增 ≤5Kb 的 DNA 片段，具有良好抑制劑耐受能力，其擴(kuò)增速度約為普通 Taq DNA 聚合酶的 3 倍，因此可大幅度減少 PCR 延伸過(guò)程所需要的時(shí)間，達(dá)到縮短整個(gè) PCR反應(yīng)的目的。不同于融合蛋白原理的快速 Taq 聚合酶，Taq-AS 的使用更加接近 WT-Taq，不易出現(xiàn)電泳條帶彌散、拖帶或者片段大小改變等狀況。本 PCR Mix 中包含兩種染料，PCR 產(chǎn)物無(wú)需添加 Loading Buffer 可直接點(diǎn)樣電泳，且電泳過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)紫色和黃色兩個(gè)指示條帶。該染料不影響 PCR 擴(kuò)增效率，但對(duì)于需要對(duì) PCR 產(chǎn)物進(jìn)行吸光度、熒光等光學(xué)分析的實(shí)驗(yàn)，建議在分析前對(duì) PCR 產(chǎn)物進(jìn)行純化。PCR產(chǎn)物 3' 端帶 A 堿基，純化后可直接用于 T/A 克隆。

質(zhì)量控制

核酸內(nèi)切酶殘留檢測(cè)

將酶液與超螺旋質(zhì)粒 DNA 在 37℃ 溫育 4h，通過(guò) DNA 電泳檢測(cè)質(zhì)粒無(wú)變化。

核酸外切酶殘留檢測(cè)

將酶液與雙鏈 DNA 底物在 37℃ 溫育 16 h，通過(guò) DNA 電泳檢測(cè)雙鏈 DNA 底物無(wú)變化。

穩(wěn)定性測(cè)試

室溫存放一周，無(wú)明顯活性改變。

功能檢測(cè)

以擬南芥基因組 DNA 和人基因組 DNA 為模板，擴(kuò)增 5kb 片段，30 個(gè)循環(huán)后經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)可見(jiàn)

目的條帶。

使用方法

1. 常規(guī)PCR反應(yīng)體系 (冰上操作)

a. 需溶解wan全后使用，防止離子濃度不均勻；

b. 引物推薦終濃度為 0.2~0.4μM，效果不佳時(shí)可以在 0.1~1μM 濃度范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整；

c. 不同模板最佳反應(yīng)濃度有所不同，以 50μl 體系為例：模板為基因組 DNA 時(shí)，一般推薦的使用量為 10~400ng；當(dāng)模板為質(zhì)粒或病毒 DNA 時(shí)，一般推薦的使用量為 10pg~20ng。

2. 三步法 PCR 反應(yīng)程序

3. 二步法 PCR 反應(yīng)程序

d. 菌落 PCR 時(shí)預(yù)變性 ≥5min，更有利于破壁。